分享一篇發表在RSC Chem Bio上的文章，題目為“Convergent construction of N-terminally modified CCL5 chemokines for photoaffinity receptor pull-down using cross-aldol bioconjugations”，通訊作者是來自英國約克大學的Nathalie Signoret和Martin A. Fascione教授，研究方向是趨化因子受體相關的分子傳感器和糖化學。
趨化因子CCL5（又稱RANTES）通過與G蛋白偶聯受體CCR5結合，參與免疫細胞的遷移和炎癥反應。然而，CCR5也是HIV-1病毒進入宿主細胞的重要共受體。因此，開發能夠阻斷CCL5與CCR5相互作用的拮抗劑，是抗HIV研究的重要方向。在此前的研究中，N端修飾的CCL5類似物（如AOP-RANTES和PSC-RANTES）表現出良好的抗病毒活性，但它們的合成通常依賴不穩定的肟鍵或全合成，存在體內穩定性差或合成復雜的問題。因此，亟需一種高效、穩定、可模塊化的化學修飾方法，用于構建功能化的CCL5類似物并研究其與CCR5的相互作用。
作者采用了一種名為OPAL（Organocatalyst-mediated Protein Aldol Ligation）的交叉醛縮合生物偶聯方法，用于在CCL5的N端引入穩定的碳–碳鍵。在該方法中，作者使用重組表達系統在大腸桿菌中表達CCL5的P2G突變體用于避免醛基環化的副反應，并通過非變性條件下切割SUMO標簽，獲得正確折疊的CCL5蛋白。隨后，作者利用高碘酸氧化CCL5 N端的絲氨酸，生成α-氧代醛（α-oxo aldehyde）官能團作為后續反應的受體。接著，在有機催化劑（如脯氨酰胺）的存在下，CCL5與不同的醛類供體（如丁醛、壬醛、芳香醛等）進行交叉醛縮合反應，形成穩定的碳–碳鍵。當使用4-疊氮苯乙醛作為供體，引入光敏基團，構建可用于光交聯的CCL5探針。最后，作者也通過鏈霉親和素磁珠進行下拉實驗，驗證了其在哺乳動物細胞中對CCR5的捕獲能力。
總的來說，在本文中作者發展了一種對趨化因子CCL5進行N端修飾的方法，通過氧化和交叉醛縮合反應在N端通過穩定的碳碳鍵引入修飾，實現了可用于光交聯的CCL5探針的構建以及其受體的捕獲。
本文作者：WYQ
責任編輯：LYC
DOI：10.1039/d5cb00162e
原文鏈接：https://doi.org/10.1039/d5cb00162e
